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        DNA凝膠回收常見問題及對策
        2015-8-18
        來源:互聯網
        點擊數: 10254          作者:未知
        • 1、 沒有回收到DNA片段 

          (1)檢查漂洗液是否按瓶身標簽注明的,加入了指定體積的無水乙醇。

          2)凝膠膠塊溶膠不徹底,導致DNA沒有釋放出來,凝膠附在吸附柱表面致使回收率極低,甚至沒有回收片段。

          3)上樣的DNA總量較少。吸附柱總會殘留部分DNA,如果上樣量過少,回收到的DNA就會過少,甚至沒有。

          2、回收率偏低

          1)溶解DNA的緩沖液與吸附柱接觸時,只有當溶液的pH 值處于酸性狀態時,才能達到理想的吸附效果。溶膠液的pH 值一般在6左右,而瓊脂糖凝膠偏堿性。當膠塊加入溶膠液后,溶膠液的pH 值必然會受到影響,如果膠塊過大時,pH 值升高就更大,DNA回收率就會降低。所以,盡可能降低膠塊體積可以避免回收率偏低。

          2)電泳緩沖液如果長時間使用,沒有更換,其pH 值會偏高,將影響DNA 的吸附。請更換新的電泳緩沖液后,再進行電泳,然后切膠。

          3)回收的DNA片段的大小對回收率的影響也是差異較大的。一般情況下300-200bp以下的小片段,回收率就會下降,且片段越小,回收率降低越明顯。大的DNA片段,比如4-5kb以上的,回收率也會下降明顯。遇到類似片段時,

             1增加回收總量;

             2將2-3管溶膠液并入一個吸附柱;

             3洗脫液進行數次循環洗脫

          4)洗脫體積偏少時,回收率會明顯降低??梢愿鶕噭┖姓f明書的要求加入合適的洗脫體積。在進行洗脫前,將洗脫液于30~60℃溫浴,可提高洗脫效率。

          5)膠塊體積加入偏大或是溶膠不徹底都可能使回收率極大降低。降低膠塊體積或是增加溶膠液體積,同時徹底溶膠會改善回收率。

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